在菌种的真实保藏条件下，取不同保藏时间点的菌种复苏，对菌种复苏后的生长曲线、纯度、遗传稳定性等进行研究，一般采用同步验证的方式开展也能接受。

实际应用场景复杂菌种在保存、运输、复苏、传代等环节可能面临温度波动、操作失误、环境变化等风险，仅研究-80℃保存的长期稳定性无法覆盖实际应用中的潜在风险。菌种特性可能发生变化长期保存的菌种可能在复苏后出现活性下降、基因突变、表型漂移等问题，需通过多维度研究验证其稳定性。

生产用菌毒种的额外研究

• 运输或短期温度波动：短期暴露于-20℃、4℃或室温（如冷链运输中温度波动）。

• 冻融次数影响：模拟多次冻融（如3次以上），检测菌种活性、代谢能力及遗传稳定性。

• 复苏后保存稳定性：复苏后短期保存（如4℃或-20℃保存7天），验证菌种活性及功能是否满足生产要求。

 检定用菌毒种的额外研究

• 短期使用稳定性：复苏后的保存时效（如4℃保存24小时、48小时后的活性）、操作过程中的耐受性（如离心、稀释）。

• 保护剂及冻存条件优化：对比不同保护剂（如甘油、海藻糖）、冻存温度（如-80℃ vs 液氮）对菌种存活率的影响。

菌种稳定性的问题上，生产用菌毒种和检定用菌毒种有一定差异。

1. 生产用菌毒种

符合种子批系统管理要求，长期稳定性是基础，参考药典总论、通则和相关指导原则设置考察项目；此外，应考擦运输（或短暂温度波动）、复苏/冻融等操作处理因素的影响和传代过程中的遗传稳定性；

2. 检定用菌毒种

结合检定项目需求和菌毒种特性制定稳定性方案，除长期稳定性考察保存期内有效生长、抗生素敏感性、指示特性等能力，还需结合使用场景考察短期稳定性（如复苏后保存时间）、多次传代稳定性、冻融稳定性、保护剂影响等。

参考资料：

人用疫苗总论

生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制

重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制技术评价一般原则

预防用疫苗临床前研究技术指导原则

疫苗生产现场检查指南，等

根据题主的问题，字面简单的理解就是菌种的长期贮存稳定性研究，这个就是在实际的保存条件下，制定相应的稳定性方案，在对应时间节点进行菌种的检定。你说的其他条件研究是类似加速，影响因素等，这种是不需要做的。

菌种保藏稳定性研究：需要在相应温度下进行保存至不同的时间节点进行放置研究，研究项目包括：长时间冻存后菌种的活性确认、菌种纯度确认等。