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2015年中国药典和与美国药典中的微生物检测方法比较
出自识林
2015年中国药典和与美国药典中的微生物检测方法比较
2018-09-20
一、中国药典2015年版和与美国药典相关章节
表1 中国药典2015年版第四卷相关章节
| 检验方法
| 指导原则
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1101 无菌检查法
1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
1107 非无菌药品微生物限度标准
1121 抑菌效力检查法
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9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则
9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则
9203 药品微生物实验室质量管理指导原则
9204 微生物鉴定指导原则
9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则
9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则
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表2 美国药典相关章节
| 微生物检验
| 生物检验和分析
| 一般信息
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<51> 抗菌效果检验
<55> 生物指标 - 抗性性能检验
<61> 非无菌产品的微生物检验：微生物枚举检验
<62> 非无菌产品的微生物检验：检验特定生物
<71> 无菌试验
| <85>细菌内毒素试验
| <1111> 非无菌产品的微生物检验：验收标准
<1113> 微生物表征，鉴定和菌株分型
<1115> 生物负载控制非无菌药物和产品
<1116> 微生物控制和无菌处理环境的监测
<1117> 微生物学最佳实验室规范
<1211> 专利文章的灭菌和无菌保证
<1227> 从药典文章验证微生物回收
<1229.3> 生物符合的监测
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二、内容比较
1. 微生物检验方法主要差异
表3 中国药典2015年版和美国药典41版微生物检验方法比较
| 美国药典
| 中国药典
| 共性
| 主要差异
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| <51>抗菌效力检查法
| 1121 抑菌效力检查法
| 相同的挑战细菌：金黄色葡萄球，菌铜绿假单胞菌，大肠埃希菌，白色念珠菌，黑曲霉
| 类别和验收标准与欧盟药典CMCC检验菌株有可比性且是指定的。
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| <61>非无菌产品的微生物检验 - 微生物计数检验
| 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
| 计数方法均包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法
| 提供马铃薯葡萄糖和玫瑰红琼脂，用于计数总酵母和霉菌数量。
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| <62>非无菌产品的微生物检验 - 特定微生物的检验
| 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
| 金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，大肠埃希菌，乙型副伤寒沙门菌和耐胆汁的革兰氏阴性菌
| 使用三糖铁琼脂作为沙门氏菌和念珠菌生色琼脂作为白色念珠菌的指示剂。
|
| <71>无菌检验法
| 1101 无菌检查法
| 应用薄膜过滤法和直接接种法，接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基。同一物种用于促进生长和适宜性检验。
| 在12 ml的体积中进行生长促进检验。 建议常规使用阳性对照。
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| <1111>非无菌产品的微生物检验：药物制剂和药用物质的限量标准
| 1107 非无菌药品微生物限度标准
| 剂型决定微生物限量标准
| 用于手术，烧伤和严重损伤的局部用药必须是无菌的。包含中药标准章节。
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当USP <61>和ChP 1105需要结果等效时，要检验的假设是两种药典检验方法给出相同的数值结果。 这与验证参数的评估形成对比，如在性能等效性中所做的那样。 因为相同的样品不能在微生物学中进行检验，所以通常在比较两种方法时建立公差间隔，其中确定的替代方法在数值上优于非劣质。
决策等价与结果等价相似，但不同之处在于不产生数值结果，而是产生的结果是通过/失败。使用这种方法，ChP 1106方法产生的阳性和阴性结果的频率应该不比USP <62>方法更差。这种非劣效性要求是基于使用参考药典检验方法进行检验和发布的产品质量的长久历史。出于鉴定目的，可以考虑涉及加入低水平微生物的实验室研究。
2. 微生物检测方法详细比较
1101 无菌检验法
硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基的处方，制备，无菌和生长促进检验基本相同，只有很小的差异。 ChP方法指定培养基用水而不是纯净水，指定将五个灭菌培养基容器孵育为无菌检验，同样指定用于生长促进检验的每种培养基的体积。 ChP方法建议在密封容器中存放时间长达一年，未密封容器最长可存放三个月。另一个区别是ChP方法推荐使用CMCC菌株进行生长促进检验和方法适用性检验。
实际检验方面，问题在于检验的单位数量和每个培养基检验的最小产品数量，包含阴性和阳性对照，以及失败的检验结果的原因。 对于肠胃外制剂，大体积注射剂，散装固体产品和医疗器械，ChP和USP检验的单位数量（USP <71>中的表3）是相同的，但ChP列出了冻干血液制品，眼科注射产品，抗生素原料散装生物制剂和体外诊断产品的要求，而USP未涉及。就每个待测容器的最小产品数量而言（USP <71>中的表2），液体和固体产品的要求相同，但ChP对大量生物制剂（未定义）和医疗器械（不同要求）有要求。进口小体积肠外营养的制药公司在定义检验方法时不会有问题，但其他产品需要根据具体情况与中国当局进行审查。使用阳性对照不是USP检验的一部分，因此需要注意。
1105 非无菌产品的微生物检验：微生物计数检验
ChP和USP方法之间几乎没有差别。 两种检验都推荐10 g样品，但ChP建议样品从不少于两个随机选择的包装单位中获得，并定义检验的阴性对照。
1106 非无菌产品的微生物检验：特定微生物的检验
ChP和USP方法之间几乎没有差别。使用三糖铁琼脂作为沙门氏菌的指示剂，使用念珠菌生色琼脂作为白色念珠菌的指示物。还加入氧化酶试验以帮助鉴定铜绿假单胞菌，并加入过氧化氢酶以帮助鉴定梭菌属。每次检验都会定期进行阳性对照。
表4A 注射剂，眼科制剂的抗菌效力标准
| 挑战微生物
| 标准
| 对数下降
|
| 6小时
| 24小时
| 7天
| 14天
| 28天
|
| 细菌
| ChP A
| 2
| 3
| -
| -
| NR
|
| ChP B
| -
| 1
| 3
| -
| NI
|
| USP
| -
| -
| 1.0
| 3.0
| NI
|
| 真菌
| ChP A
| -
| -
| 2
| -
| NI
|
| ChP B
| -
| -
| -
| 1
| NI
|
| USP
| -
| -
| NI
| NI
| NI
|
注：
NR：试验菌未恢复生长
NI：未增加 , 是指对前一个测定时间 , 试验菌增加的数量不超过0.5 lg
1107 非无菌药品微生物限度标准
ChP微生物学限量标准的差异包括口服产品如果含有有机提取物不能检出沙门菌 （10 mL或10 g），口腔粘膜，牙龈，鼻腔和吸入药品不能检出大肠埃希菌（1g 或1ml），直肠给药不能检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g或1ml）。 这些要求将改变许多非无菌剂型的微生物规格。
表4B 耳科制剂，鼻滴剂，皮肤用药和吸入剂的抗菌效力标准
| 挑战微生物
| 标准
| 对数下降
|
| 2天
| 7天
| 14天
| 28天
|
| 细菌
| ChP A
| 2
| 3
|
| NI
|
| ChP B
| -
| -
| 3
| NI
|
| USP
| -
| -
| 2.0
| NI
|
| 真菌
| ChP A
| -
| -
| 2
| NI
|
| ChP B
| -
| -
| 1
| NI
|
| USP
| -
| -
| NI
| NI
|
1121 抗菌效力检验
抗菌效力检验（AET）的核心是微生物杀灭悬浮试验（如下图）。将攻击生物体的受控接种物与待测样品一起悬浮，然后在不同时间点测定存活菌的数量。这种简单的设计在以可控方式比较各种防腐剂体系的生物活性的机会方面具有一些真正的优势。
ChP方法建议在液体培养基中培养接种物，通过离心收集细胞，洗涤细胞，并制备接种悬浮液。 验证挑战生物恢复的标准大于70％，而不是USP方法的要求的50-200％之间。 类别和限量标准与欧洲药典5.1.3相当，而非USP <51>（见表4.A，4.B和4.C）。 美国，欧洲，日本药典的限度标准不统一，预计中国药典可能将继续遵循欧洲药典。
表4C 口服制剂和直肠给药的抗菌效力标准
| 挑战微生物
| 标准
| 对数下降
|
| 14天
| 28天
|
| 细菌
| ChP
| 3
| NI
|
| USP
| 1.0
| NI
|
| 真菌
| ChP
| 1
| NI
|
| USP
| NI
| NI
|
3. 非无菌药品微生物限量标准比较
表5 中国和美国药典非无菌药品微生物限量标准比较
| 剂型
| 中国药典微生物限量标准
| 美国，欧洲和日本药典微生物限量标准
|
|
| 微生物计数（CFU每 ml或g）
| 没有特定的微生物(ml或g）
| 微生物计数（CFU每 ml或g）
| 没有特定的微生物(ml或g）
|
| 口服固体
| TAMC NMT 103
TCYMC NMT 102
| 大肠埃希菌
| TAMC NMT 103
TCYMC NMT 102
| 大肠埃希菌
|
| 口服液体
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 大肠埃希菌
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 大肠埃希菌
|
| 口腔黏膜，牙龈，鼻道
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌
|
| 吸入使用
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，耐胆汁革兰阴性菌
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，耐胆汁革兰阴性菌
|
| 直肠用药，液体
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 无
|
| 直肠用药，非液体
| TAMC NMT 103
TCYMC NMT 102
| 铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 无
|
| 阴道和尿道使用
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，白色念珠菌
| TAMC NMT 102
TCYMC NMT 101
| 铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，白色念珠菌
|
| 斜体表示主要不同之处。
|
对口服剂型以外的产品不能检出大肠埃希菌的筛选检验的价值应该被质疑。 ChPC应借此机会将验收标准调整与美国，欧洲，日本协调一致。（见表5）。
三、参考文献
1 Thomas C. Kupiec, Microbiology Testing: USP Requirements for Sterile and Nonsterile Preparations, August 2017 url.
2 Fran M, USP Updates <61> and <62> for Microbial Testing of Non-Steriles, Apr 23, 2009 url.
3 Anthony G, Harmonized Pharmaceutical Microbiology, May 2008 url.
4 Zhang Wei, Overview of Chinese Pharmacopoeia Commission (ChPC) & Update of Chinese Pharmacopoeia (ChP), October 17, 2016 url.
5 Tony C.Comparison between the Microbiological Testing Methods in the 2015 Chinese Pharmacopeia and the United States, September 10, 2018 url
作者：识林-槿
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