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出自识林

2019-02-27

2月21日，WHO发布了良好色谱实践（Good Chromatography Practices）征求意见稿文件，这是非常有意义的、专门适用于色谱的良好实践。为更好的理解该文件，我们收集了安捷伦公司专家对于文件的点评，并在此基础上对于文件的特色部分做了亮点分析。

• 安捷伦大中华区液相产品应用经理陈波先生点评：WHO 良好色谱实践提出对色谱分析关键过程的指导原则，尤其是对色谱峰的判定、积分参数的选择使用和峰异常情况处理的原则，具有很强的参考价值。同时对色谱实际使用中的试剂、色谱柱、样品管理也给出清晰的建议。

• 安捷伦大中华区实验室信息系统产品经理张之旭先生点评：总体来讲，新发布的文件针对色谱系统，从采样，称重，数据采集，数据处理，原始数据及元数据的管理都做了比较详细的说明。尤其是清晰地定义了数据，元数据，备份，积分的各种形式，以及CSV涉及的不同阶段URS，DQ，FAT，SAT，IQ，OQ，及PQ。更详细指出积分的原则，手动积分的适用范围，建议使用网络化软件连接所有色谱系统，系统时间及时区的管理。对于QC实验室色谱系统遵从法规具有非常实用的指导意义。

下文是第12、13、14、15章亮点内容的分析。

12. 色谱方法（采集和处理）

亮点：
12.3 方法的创建和保存由指定人员进行，修改需要由授权的人员进行。这就是说：这些方面的人员权限应在SOP中有规定。
12.4 所采集的结果应使用经过验证的方法进行处理。应可追溯，并反映在审计追踪里。这就是说：有些处理操作（重画基线、干预时间窗口）需要注意了，详见第14章“峰积分”。

12.1. 所选择的色谱方法应适合其预期用途。

12.2. 非药典方法应开发、验证并在标准规程中详细说明。这些工作应由有资质有经验的人员进行。

12.3. 在色谱系统中，方法应尽可能由指定人员创建和保存。分析所选择的方法不应进行修改，除非经由授权人员批准用于其预期用途。

12.4. 所采集的结果应使用经过验证的方法进行处理。如果采集和处理方法不同，所选方法应可追溯，并可在审计追踪中反映。

12.5. 应证明方法在其生命周期过程中始终保持经验证的状态。

13. 色谱峰

亮点：
13.1 色谱分析应符合ALCOA+原则。
13.2 方法验证中考虑的因素，列出了很多：回收率实验、斜率灵敏度、峰宽、集束因子、最小峰面积、噪声阈值、峰面积阈值；那么，系统适应性试验参数（理论塔板数、分离度、灵敏度、拖尾因子、重复性）、检测限度、定量限度、准确度、精密度、专属性、线性、范围等验证参数是否涵盖了这些因素，应与色谱仪器供应商探讨。

13.1. 色谱分析应符合ALCOA+原则。

13.2. 方法验证中考虑的因素应包括：
• 回收率实验
• 斜率灵敏度
• 峰宽
• 集束因子
• 最小峰面积（忽略阈值）
• 噪声阈值
• 峰面积阈值

13.3. 应根据法定政策和规程，包括国家药监机构、药典和分析验证的建议和要求，对峰的可接受性进行审核。

13.4. 如果在复杂分析中使用了不止一支色谱柱，规程和指令应清楚以确保在分析中不会出错。

13.5. 规程应包括本指南中关于良好色谱实践的建议和考量，以及对法定政策、可接受限度（适当时）和ALCOA+的具体参考。

14. 峰积分

亮点：
14.3/14.4 其他通用指导原则很少涉及“积分参数的使用”，所以该条款具有很强的参考价值。
14.5/14.7/14.8/14.9其他通用指导原则很少涉及“峰异常情况处理”，所以该条款具有很强的参考价值。14.5 关于未完全分离的峰，应阐明何时可使用不同函数对未完全分离的峰进行积分；14.7 关于手动积分；14.8 关于手动设置基线对峰高和峰面积进行积分；14.9 关于 平滑处理；
关于手动积分，请查看识林资讯【对手动积分的认知】。

14.1. 分析色谱中的峰面积积分应准确一致、科学合理。

14.2. HPLC和GC仪器应尽可能与自动进行积分处理的计算机化色谱数据采集和处理系统设置接口。

14.3. 除另有科学论证外，同一样品序列中的所有峰均应使用相同的积分参数。

14.4. 处理软件用于定义相应的色谱峰的参数（如斜率灵敏度、噪声阈值、峰宽、峰面积阈值和集束因子及撇去比率），应选择适当参数值。

14.5. 为便于对色谱峰进行准确积分，有必要将所有峰完全分离。如果必须从未分开的峰中获得定量数据，则实验室应制订明确的原则说明如何对这些峰进行积分。其中应包括阐明何时可使用不同函数对未完全分离的峰进行积分，如：
• 切线撇去
• 指数撇去
• 指数曲线拟合
• 直线撇去
• 前伸峰撇去
• 拖尾峰撇去
• 峰谷比
• 谷高比

14.6. 经过验证的方法、具体的色谱条件以及良好色谱实践应有助于获得对称峰。如果发现有前伸峰、拖尾峰、分裂峰或其它类型的峰，应进行调查，找出根本原因并采取适当的CAPA。

14.7. 如果必须进行手动积分，则应遵守经过批准的程序。应保存记录，其中包括手动积分的批准和理由。

14.8. 只有例外情形下，才允许利用色谱软件手动设置基线对峰高或峰面积进行积分。这样做的权限只能授予特定用户。当按这一程序积分时，应提供记录和理由。

14.9. 如果做了平滑处理，所用“筛选”类型和平滑处理的程度应进行论证。

15. 清洁验证

亮点：
15.1关于清洁验证和清洁确认，应尽可能开发、验证具有专属性的方法。这就是说，清洁验证和确认中，活性成分含量低，并应该考虑到清洁剂残留，开发方法并验证。

注：关于清洁验证的建议参见附录4“GMP补充指南：验证”（WHO第937号技术报告，2006，附录3）。

15.1. 应尽可能开发、验证具有专属性的方法，然后用于清洁验证和清洁确认中。

15.2. 所选色谱方法应具有专属性，适合于检出分析对象。

15.3. 数据和结果应根据这些指南，清洁验证、色谱相关的其它指南以及药典适用章节进行管理。

15.4. 数据和结果应保存适当时长以备相应检查。

有需要的读者请仔细阅览文件原文及中文翻译。

梳理：识林-榕
校译：识林-棉

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