首页 > 资讯 > FDA 发论文为亚硝胺检测方法辩护，USP 推出检测亚硝胺的新标准品

出自识林

2020-07-28

美国 FDA 认为其对二甲双胍中 N-亚硝基二甲胺（NDMA）的检测结果比私营实验室 Valisure 的结果更准确。7 月份发表在美国药物科学家协会（AAPS）上的一篇论文为 FDA 的检测方法做了辩护。FDA 表示，私营实验室的方法“不适用于对二甲双胍药品中的 NDMA 进行定量分析，原因是存在可能干扰检测结果的物质而导致 NDMA 的高估。”

论文题目为：“警示故事：二甲双胍中 N-亚硝基二甲胺分析的定量 LC-HRMS 分析程序”(A Cautionary Tale: Quantitative LC-HRMS Analytical Procedures for the Analysis of N-Nitrosodimethylamine in Metformin)，作者是 FDA 的 Jingyue Yang 等人[1]，评估了造成两种检测结果差异的原因。文中列出了 FDA 检测结果与私营实验室检测结果的数据对比（见下表）。

5 月底，FDA 根据最新检测结果证实，在二甲双胍缓释制剂中的 NDMA 含量超出可接受范围，并建议五家公司自愿召回自己的二甲双胍缓释产品。【与原料药无关：FDA 公布二甲双胍缓释片亚硝胺杂质超标】这一检测结果推翻了 FDA 之前于 2 月份公布的对二甲双胍样品的实验室分析结果，当时 FDA 认为已检测的样品中 NDMA 水平非常低，不建议在美国召回产品。【FDA 公布对二甲双胍中 NDMA 的检测结果 2020/02/06】但是，FDA 的最新检测结果仍然整体低于私营独立实验室 Valisure 的检测结果。Valisure 的首席执行官 David Light 在 6 月份的参议院财政委员会听证会上作证时表示，FDA 的检测政策存在结构性问题。【FDA 二甲双胍 NDMA 检测结果整体低于独立实验室检测 2020/06/08】

论文指出，私营检测实验室的方法在检测 NDMA 方面不如 FDA 准确。“FDA 认为，私营实验室报告的高 NDMA 值的可能原因是存在与NDMA 共洗脱的干扰物质二甲基甲酰胺（DMF），并且私人实验室方法未提供在 DMF 存在的情况下对于 NDMA 的选择性。”欧洲药品管理局（EMA）已建议原料药生产商避免使用 DMF 溶剂，因为其会导致 NDMA 的形成。

IPEM 教育项目教师组表示，“FDA 这篇论文确实指出了在 ppb 层面检测亚硝胺杂质所存在的一个主要挑战，即样品基质中的其它成分可能对结果造成假阳性的结果，这一现象在其它基因毒杂质的痕量检测中也会存在，是一个普遍现象。”

教师组还详细点评了针对不同产品的 NDMA 检测方法可能存在的问题，并给出了解决方案。“对于二甲双胍中的 NDMA，目前已有的数据似乎指向 NDMA 可能是二甲双胍的降解杂质，这可能是无法用 GC-MS 来检测二甲双胍样品的原因，因为 GC-MS，无论是顶空或直接进样，都有可能造成样品分解产生 NDMA，类似雷尼替丁。因此只能用 LC- MS/MS 或 LC-HRMS , 用 LC 的目的是为了避免样品分解，用 MS/MS 或 HRMS 是为了降低样品基质的干扰。但是对于二甲双胍样品，其中微量的 DMF 很容易对 NDMA 造成干扰，因为在反相 LC 中，NDMA 很难与 DMF 达到有效分离，所以在这种情况下，DMF 的N15 同位素和 C13 同位素在 MS/MS 检测条件下会干扰 NDMA 的检测，因为前二者的表观分子量与后者的相同，而且它们的离子碎片也很类似。在 HRMS 检测条件下，如果精确分子量的容忍空间不是设置的足够严，例如 15ppm，那么 DMF 的 N15 同位素也会对 NDMA 的检测形成干扰，因为二者的分子量之间的差异只有 24ppm。解决这个问题的一个有效途径可能是把反相 LC 改为 HILIC 模式，后者能够将 NDMA和DMF 基线分离。已经有仪器制造商开发了这样的方法。”

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USP 推出用于检测亚硝胺的新参照标准品

另外，美国药典会 USP 于本月初宣布推出六种新参照标准品，以支持生产商和监管机构对药物供应链中潜在有害的亚硝胺杂质进行检测：

• N-亚硝基二甲胺（NDMA）（1 mg/mL 溶于甲醇）；
• N-亚硝基二乙胺（NDEA）（1 mg/mL 溶于甲醇）；
• N-亚硝基二异丙胺（NDIPA）（1 mg/ML 溶于甲醇）；
• N-亚硝基二丁胺（NDBA）（1 mg/ML 溶于甲醇）；
• N-亚硝基乙基异丙基胺（NEIPA）（1 mg/ML 溶于甲醇）；
• N-亚硝基甲基氨基丁酸（NMBA）（1 mg/ML 溶于乙腈）。

这些标准品可用于根据 USP 通则中的方法检测生产商的物料。USP 表示，这些标准品“经过高度表征，并且已通过 USP 在多个实验室之间的协作过程进行了严格的评估。”USP 还宣布将在 9 月份提出新的 USP-国家处方集通则标准征询公众意见，拟议标准将涉及评估亚硝胺的存在，并建立减少这些杂质的控制策略。

[1] Yang, J., Marzan, T. A., Ye, W., Sommers, C. D., Rodriguez, J. D., & Keire, D. A. (2020). A Cautionary Tale: Quantitative LC-HRMS Analytical Procedures for the Analysis of N-Nitrosodimethylamine in Metformin. The AAPS Journal, 22(4), 1-8.

整理：识林-椒
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